鼠肝細(xì)胞器的超速分離方法舉例

Ⅰ.前處理：
鼠肝勻漿，臺(tái)式離心機(jī)1,000xg，10分，取上清，沉淀稀釋后再1,000xg，10分，取上清，再重復(fù)一次取上清，三次上清液合并用于超速離心。

Ⅱ. 密度梯度離心：
日立超速離心機(jī)（各種型號(hào)）
轉(zhuǎn)頭：P45AT（6×94ml，實(shí)際容量85ml）
不連續(xù)蔗糖梯度：10％，20％，30％，40％，50％（w/w），各15ml，樣品約10ml鋪在表面
轉(zhuǎn)速：40,000rpm，186,000xg
時(shí)間：2.5hr
溫度：4℃
加速/減速：6/6

Ⅲ. 結(jié)果：
用日立DGF－U或手工取出梯度液，自上而下收集成30管，每管分別測(cè)定密度及測(cè)定260nm ABS值并繪成如下曲線：

可以看出：水溶性蛋白沉降在近離心管表面的及低蔗糖密度區(qū)；核糖和蛋白體沉降在16％－18％蔗糖密度區(qū)；光滑質(zhì)膜沉降在27％－28％蔗糖密度區(qū)；質(zhì)膜沉降在37％－38％蔗糖密度區(qū)；線粒體沉降在42％－43％蔗糖密度區(qū)，而粗質(zhì)膜沉降在45％－46％蔗糖密度區(qū)。