锘海生物組織透明化試劑盒大促銷！

瀏覽次數(shù)：5316　發(fā)布日期：2021-8-23　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉載請注明出處

近年來組織透明化方法發(fā)展得如火如荼，目前組織透明化方法有油性，基于水凝膠和水性的組織透明化方法。其中油性組織透明化方法主要有BABB, 3DISCO, uDISCO，F(xiàn)DISCO和 PEGASOS等，基于水凝膠的透明化方法有CLARITY和SHIELD，水性組織透明化方法有CLear^T/CLear^T2,SeeDB, FRUIT, Scale和CUBIC等方法。亂花漸欲迷人眼，面對種類如此繁多的透明化方法，我們又該如何選擇呢？那么就讓我們一起來看看每種透明化方法有什么優(yōu)缺點吧！

1. 油性組織透明化方法

油性組織透明化技術主要是應用含有高折射率介質的光學透明劑取代組織中水分和脂質來平衡組織折射率，使組織達到光學透明。油性組織透明化方法具有較強的透明化效果，但是組織中的熒光蛋白容易被破壞，信號保存度低。

BABB透明化方法采用梯度濃度的乙醇對生物樣本進行脫水，隨后用BABB試劑匹配組織的折射率。該方法是一種快速且透明性好的生物組織透明化方法，能夠充分的透明胚胎和幼鼠的腦，但是乙醇脫水會導致內源性熒光蛋白淬滅，因而限制了該方法在含轉基因熒光蛋白的組織樣品中使用。為了解決這一問題，采用四氫呋喃代替乙醇脫水，同時應用二芐醚（DBE）替代BABB提高透明效率，開發(fā)出了基于四氫呋喃和DBE的新型透明化方法3DISCO。3DISCO能夠快速透明多種器官組織，包括小鼠大腦，肺臟，腫瘤及人類胚胎等，并有效延長了熒光蛋白的表達時間。雖然3DISCO能夠保護內源性熒光蛋白，但是DBE的降解產物如過氧化物或醛類物質，會對熒光蛋白產生有害干擾，使熒光蛋白信號僅能維持幾天。為了更有效的保存內源性熒光蛋白，一種基于二苯醚（DPE）的透明化技術uDISCO,可以高效透明嚙齒類動物及臨床人類標本，有效保存熒光蛋白信號長達數(shù)月，但是對于綠色熒光蛋白表達水平較低的樣品，該方法保存熒光蛋白信號的能力并不理想。a-uDISCO是在uDISCO的基礎上發(fā)展出來的，通過調整PH值從而提高了樣本的信號強度和穩(wěn)定性。但是uDISCO和a-uDISCO對色素含量較高及硬組織的透明效果欠佳。為了提高透明效果，一種基于聚乙二醇(PEG)的新型全組織透明技術PEGASOS被開發(fā)，該方法脫鈣，脫色，脫水，脫脂等優(yōu)化處理，首次實現(xiàn)了對動物軟、硬組織的同時透明化。雖然PEGASOS具有較好的透明化效果，也適用于生物體不同類型的組織。然而此類方法也存在透明試劑毒性較大，易溶解物鏡結構中的粘合劑、操作步驟繁瑣，組織脫水收縮等不足之處。

油性組織透明化方法能夠快速高效透明多種樣本組織，但是油性試劑透明會導致樣本皺縮，對組織結構和蛋白具有潛在的破壞性，且所使用試劑具有一定的毒性和腐蝕性，限制了油性透明化方法的廣泛應用。

2. 水性組織透明化方法

由于油性透明化存在的諸多缺點和局限性導致水性透明化方法應運而生。水性透明化與油性透明化方法的最大區(qū)別在于選擇的生化試劑是否有強親水性。由于組織中熒光蛋白分子上帶有親水基團，與油性溶劑相比親水溶劑更有利于熒光蛋白信號的保存。更適用于自帶熒光的組織樣本的透明化。親水性試劑透明主要包括：單純浸泡透明和高水化脫脂透明。

浸泡型透明化技術是將樣品浸泡在高折射率溶液中利用滲透壓使組織逐漸透明化，該方法不去除脂質，利用高折射率溶液替換組織內外的液體，以平衡折射率，浸泡型透明化方法常適用于較小樣本的透明化處理。Clear^T是基于甲酰胺的浸泡型透明化方法，該方法透明速度快，成像效果好，但會使組織略微膨脹，且會使樣本熒光信號淬滅。PEG可以穩(wěn)定蛋白質構象，繼而發(fā)展了可保留熒光蛋白的Clear^T2的透明化技術，但該方法透明度比clear^T低，透明化能力受限。SeeDB技術以果糖和硫代甘油為主要成分。能在幾天內將樣本透明化，且體積變化小，并可以與親脂性染料兼容。但該方法因果糖黏度大導致在組織內的滲透性較低。由于SeeDB黏度極高，在SeeDB基礎上衍生了FRUIT透明化方法，該方法選擇尿素作為試劑中另一成分，降低了果糖黏度，大大提高試劑流動性和滲透性，加速了試劑在組織中的擴散速率。雖然浸泡型透明化操作比較簡單方便，但浸泡型透明化方法不能去除脂質，因此通過該方法處理的樣本透明度有限。

去除樣本的脂質可以顯著提高透明化的效率和質量，胺基醇類和去垢劑類物質如SDS、Triton X-100可以有效去除脂類物質。水化法通過在透明化過程中去除脂質后，利用水化作用降低樣本折射率進而實現(xiàn)組織透明化。由于尿素具有很強的水化能力，Scale透明化技術就是基于尿素水化作用的一種透明化方法，該方法可保留熒光信號，但該方法操作時間較長，且易導致組織破碎。CUBIC在Scale技術之上添加了胺基醇，可以清除血紅素使組織脫色，提高透明化水平。UbasM也是一種基于尿素，葡甲胺和糖類的透明化方法，透明速度快，熒光信號保護較好且膜脂完整的一種透明化方法，可對厘米尺度的樣品進行透明和三維成像。

3. 水凝膠組織透明化方法

去垢劑可以高效的去除樣本中的脂類物質，但是高濃度的去垢劑處理樣本可能會使樣本發(fā)生形變。通過將樣本包埋在水凝膠中，使水凝膠與樣本中的蛋白質和核酸分子形成共價連接便可固定和保護細胞結構，再將樣本置于透明化試劑中即可避免樣本發(fā)生這種形變。CLARITY透明化方法利用凝膠包埋樣本，并利用電場力去除樣本的脂質從而使樣本快速透明。SHIELD透明化方法通過環(huán)氧化合物P3PE固定組織實現(xiàn)蛋白的保護，之后使用SDS進行被動或主動除脂。

油性透明化方法透明的樣本透明度高，速度快，能適用于多種組織和器官。但是油性方法所使用的試劑大多毒性較強，并且容易淬滅內源性熒光蛋白的信號，不能和細胞膜上親脂染料相兼容，樣本會有明顯收縮，組織或器官內部精確三維結構丟失。水性透明化方法雖然可以部分解決熒光蛋白易淬滅的問題，但是也存在透明時間長，透明能力低的缺點。水凝膠透明化方法操作過程復雜，且需要一定的設備。

面對種類如此繁多的透明化方法，我們該如何進行選擇呢？

锘海研發(fā)的透明化試劑盒依托測樣服務中積累到的豐富而寶貴的經驗，對各種透明化方法進行測試和比較后對試劑配方進行了精心優(yōu)化，使其在組織熒光保護、樣本形態(tài)維持、降低自發(fā)熒光等方面表現(xiàn)出非常優(yōu)異的性能。能夠輕松實現(xiàn)小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、睪丸、淋巴、胎盤、卵巢等各類組織器官的透明化，適用范圍廣、操作簡便、速度快、效率高，是廣大科研工作者的不二之選。

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