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昊諾斯15期組織研磨和樣品處理分享:擬南芥核酸提取

瀏覽次數(shù)：3445　發(fā)布日期：2016-11-14　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請注明出處

1個(gè)關(guān)于擬南芥研磨提取核酸引發(fā)的討論

本周昊諾斯第15期組織研磨和樣品處理分享、討論，我們給大家分享的內(nèi)容是——擬南芥研磨提取核酸。

那接下來，就讓我們先睹為快，看看這個(gè)案例的情況。

實(shí)驗(yàn)：擬南芥研磨提取核酸

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：某大學(xué)

實(shí)驗(yàn)樣品：擬南芥

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、在2ml圓底離心管底放入擬南芥樣品，每管樣品量不超過單管體積的1/3；

2、在離心管中加入3mm硬質(zhì)不銹鋼研磨珠2顆；

3、接下來的步驟根據(jù)提取目的不同操作略有不同，以表格形式展現(xiàn)如下：

此外，我們的分享嘉賓還跟群內(nèi)用戶進(jìn)行了激烈的分享、討論，讓我們一同來看看擦出了怎樣的火花吧！

昊諾斯嘉賓：大家好，之前跟大家分享過幾期多是動物組織，這次我們分享一次植物組織的案例。植物組織的特點(diǎn)是一般樣品量比較大，老師們多會采用2ml的離心管，每次用適配器的話就是2mlx2X56的研磨量，基本都可以滿足實(shí)驗(yàn)的需求了。

昊諾斯嘉賓：之所以想跟大家分享這次的案例，是因?yàn)檫@位老師采用的組織研磨儀研磨方式比較系統(tǒng)全面一些，用組織研磨儀濕磨和冷凍研磨都有。濕磨他通常是在提取DNA的時(shí)候使用，冷凍研磨多用于提取RNA，不知道群里各位老師是否也是采用類似的研磨方式。

昊諾斯嘉賓：在這個(gè)案例中，我們看到樣品是擬南芥，像其他的葉片類組織，比如黃瓜、苜蓿、水稻等，都可以采用同樣的設(shè)置進(jìn)行研磨。

用戶：DNA和rna的提取條件有什么區(qū)別？

昊諾斯嘉賓：RNA的話我們知道比較會容易降解，所以會需要浸泡液氮，以及將用具進(jìn)行滅菌，而且盡可能在保證快速短時(shí)間的研磨條件下進(jìn)行。

用戶：做過生菜。

昊諾斯嘉賓：您可以跟我們分享下您提生菜葉片的條件嗎？是提取RNA還是DNA呢？

用戶：液氮手工磨，DNA。上學(xué)時(shí)，全是手工配，累死。

昊諾斯嘉賓：還好生菜應(yīng)該是屬于容易研磨的類型吧。

用戶：玻璃研磨器都沒法用，只能陶瓷的，玻璃直接炸。

昊諾斯嘉賓：您可以用一用我們的組織研磨儀。

用戶：現(xiàn)在不做了。

昊諾斯嘉賓：提DNA的話用自動組織研磨儀就可以濕磨，也方便后期離心，不用擔(dān)心轉(zhuǎn)移帶來的污染了。不做了就解放雙手了。

昊諾斯嘉賓：一般來說，如果是較有任性的植物組織，比如水稻莖等，對樣品的進(jìn)入量大小要求會略嚴(yán)格。

用戶：抽提液離心管還不能用滅菌的。

用戶：禾本科的植物相對難磨。

昊諾斯嘉賓：如果能盡量將樣品本身剪成1cm長左右的小段會對研磨有大幫助。

用戶：恩，所以用液氮。

昊諾斯嘉賓：是的，您是不是做過類似的植物樣本？

用戶：對，我們實(shí)驗(yàn)室只做植物樣品。

昊諾斯嘉賓：如果是研磨剛說的韌性含纖維的植物樣本，除了剛老師說的用液氮，也可以同時(shí)采用1大1小的鋼珠來研磨。

昊諾斯嘉賓：那您這邊經(jīng)驗(yàn)應(yīng)該比較豐富的，您一般做的都有哪些樣品呢？

用戶：我們這一般的植物樣品都有，豆類，玉米，油菜牧草類。

昊諾斯嘉賓：樣品種類確實(shí)很多啊。

用戶：我們是植物實(shí)驗(yàn)室。

昊諾斯嘉賓：一般來說，您覺得哪種比較難磨呢？

用戶：我們好多樣品是直接研磨種子，豆類、油菜、苜蓿種子不好磨。

用戶：組織研磨儀研磨珠用的什么材質(zhì)的？

用戶：我們的組織研磨儀用的是萊馳的mm400，用的是大的不銹鋼珠。

昊諾斯嘉賓：用的是不銹鋼的，3mm的鋼珠。

用戶：擬南芥是什么東東？

昊諾斯嘉賓：實(shí)驗(yàn)用的擬南芥看著還挺可愛的，長在培養(yǎng)皿里，小小的一整片。

用戶：植物研究的模式植物。

用戶：我還以為是藥材呢。

昊諾斯嘉賓：種子的話，用組織研磨儀您一般會間歇多次研磨嗎？還是說一次性研磨幾分鐘？

用戶：玉米及其他相對容易磨的，一次性一分鐘基本沒問題，豆類和苜蓿種子一般兩三次，但一定先要液氮處理過。

昊諾斯嘉賓：是的，種子和我之前說的水稻莖這種一定要液氮過才能出研磨效果。

用戶：這就是擬南芥。

昊諾斯用戶供圖

昊諾斯嘉賓：謝謝史老師，擬南芥植物中的果蠅。對于難研磨的樣品，我們有時(shí)也會采用之前說的大鋼珠配小鋼珠的研磨方法，大鋼珠可以把大塊打成小塊，小鋼珠再通過不停的撞擊把樣品研細(xì)。

用戶：屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具有代表性或者把復(fù)雜物質(zhì)簡單化。樣品的提取效率怎么樣？

昊諾斯嘉賓：樣品的提取效率是有保證的，之前也有過案例分享是和手研磨的進(jìn)行比對，效果是比較突出的，一般老師提取之后會跑一個(gè)電泳，看膠圖的效果，之后在進(jìn)行具體的檢測和下一步工作。上次分享的案例是做藥物代謝分析的，結(jié)果也是讓老師滿意的。

昊諾斯嘉賓：樣品的自動研磨效果確實(shí)對后續(xù)提取核酸、蛋白，酶，以及其他成分分析類實(shí)驗(yàn)是很有幫助的

用戶：嗯，非常好。

最后，讓我們共同期待第16期“組織研磨和樣品處理分享、討論”活動吧！下期，我們不見不散！
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